Diabetologia：抑制但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现家兔自身特异性到再次出现1改型乳癌临床疼痛的实质性率在婴幼儿时期就有很好的描述，多个家兔自身特异性白血病的婴幼儿里有70%在肝细胞转换后10年内肺结核乳癌，而随访15年的婴幼儿这一%缩减到84%。比起较，占临床1改型乳癌一半以上的改型1改型乳癌的患病机制还没有赢取更进一步的归纳。

愈来愈多的人开始可用分期系统来定义1改型乳癌的实质性：性状在再次出现多种家兔自身特异性时转到第1下一阶段，再次出现胰岛素精神状态时转到第2下一阶段，再次出现疼痛时转到第3下一阶段。一些多发家兔自身特异性白血病的性状，在1期和2期，实质性较很慢，并发展为患病的1改型乳癌。我们前描述了一四组在首次检测到多种家兔自身特异性抽取后数10年无乳癌的极很慢实质性者，这四组病患者人数不及，但特征相当明确。随后，我们发现家兔自身蛋白质特异性CD8+T细胞核反应会在实质性缓很慢的病患者里基本不存在，但在最近患病和长期存在的乳癌病患者里很容易检测到。这显然表明，与实质性病患者比起，这些病患者自身病原体会的缓冲增强。

早期计算出来正确性，尽管缓冲性T细胞核(Treg)数量正常，但乳癌病患者存在一些特性瑕疵，其里包括对IL-2的反应会遏制能力减不及。此外，乳癌病患者里的现象CD4+T细胞核显然对缓冲不够具抵抗性，体现为现象T细胞核的诱导减弱，自然显现出的Treg和体外显现出的诱导Treg，以及蛋白质年中的CD4+T细胞核里IL-2反应会减弱。本归纳的旨在是描述了CD4+缓冲性T细胞核(Treg)在一小群极缓很慢实质性者里的特征，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX归纳是一项以人群为基础的纵向归纳，在21岁表列出复发的病患者直系亲属里安全检查1改型乳癌的危险因素。我们前描述了长期缓很慢实质性者的特征，他们维持多重家兔自身特异性白血病超过10年，但没有再次出现乳癌的临床疼痛，很慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名此后维持无乳癌并情愿发放大量血液抽取的缓很慢实质性者划入T和B细胞核特性归纳。在迄今的归纳里，8名很慢实质性者(SP四组)，里位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身特异性白血病。所有的发起者都处于1改型乳癌实质性的1期，尽管一些人随后耗尽了家兔自身特异性对某些蛋白质的白血病反应会，然而，一名病患者已经处于2期数6年，但没有再次出现临床疼痛，一名病患者被诊断为乳癌，该患者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里对该酪氨酸顺利完成了单独风险评估。除去外周血单个核细胞核(PBMCs)，换用多参数流式细胞核术和T细胞核诱导试验风险评估酪氨酸里Treg的kHz、特异性和特性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、举例来说和复归)顺利完成无监督聚类归纳，风险评估Treg特异性。

结果：与肥胖症酪氨酸比起，来自很慢实质性体的知觉CD4+T细胞核的监督聚类标示出，激活的知觉CD4+ TregkHz缩减，与组胺诱导的TNFR方面蛋白(GITR)隐含缩减有关。一名HbA1c消退的病患者与实质性缓很慢者和匹配的印证四组比起，Treg谱有所各不相同。特性计算出来正确性，与肥胖症酪氨酸比起，来自缓很慢实质性体的Treg介导的CD4+现象T细胞核诱导明显受损。体现为对现象CD4+T细胞核CD25和CD134隐含的诱导缩减。

左图1 深入的特异性归纳标示出，CD4+Treg亚改型在很慢实质性配置文件里缩减。由FlowSOM填充的Treg三楼，围住在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标识物隐含鉴定出10个元簇:知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)可用9个各不相同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个键值代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，巨大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值四组外面着色。每个键值里的饼左图坚称单个标识的隐含级别。(b)每个元聚类的热左图，以标示出总体标识隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)填充左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于轻元素为每个metacluster箱内终点站左图(轻元素> 0.05%)相符为HD和SP四组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核(l)。橘色左上角代表人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 可用CITRUS的预测模改型证实，TregkHz的缩减是实质性缓很慢的标志。分级门控(a - f)和甜菜归纳(g-k)相比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的近现代左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利完成除去，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑斑)和SP(白点)四组以及酪氨酸SP 606(橘色)里CD25+ cd127的kHz摘要左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控次子集的箱内终点站左图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含风速着色，标记醒目的簇被识别为SP和HD配置文件之间的各不相同。(j)箱内终点站左图标示出了在SP(白点)和HD(灰点)四组里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对于轻元素(%)。(k)直方左图标示出每个簇的特异性(粉红色)和Treg标识相对于隐含与背景隐含(红色);上列，线程Treg_3;下面几天后，线程Treg_4。背景与所有其他簇里标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

左图3 与肥胖症献血者比起，实质性缓很慢者知觉treg的GITR缩减。每个知觉CD4+T细胞核元簇(知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标识的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的隐含热左图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR隐含联接，标示出直方左图(c)和摘要左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(橘色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(红色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR隐含，从分级门控，从所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)联接，标示出直方左图(e)和摘要左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

左图4 来自缓很慢实质性的CD4+ treg细胞核遏制现象CD4+T细胞核的遏制能力减不及。SP四组用红色的终点站和左上角坚称，HD四组用黑色的终点站和左上角坚称，橘色的终点站/左上角坚称酪氨酸sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按辨别的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，培养3当晚顺利完成流式细胞核术检测。(a-d)与CD4+需要的话者相对于应的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE诱导百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导百分比。可用白血病印证(激活的响应细胞核不含treg)计算诱导百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

左图5 现象CD4+T细胞核对缓很慢实质性的T细胞核再生的诱导不够敏感。SP四组用红色的终点站和左上角坚称，HD四组用黑色的终点站和左上角坚称，橘色的终点站/左上角坚称酪氨酸sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按辨别的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，培养3当晚顺利完成流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因次子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同完成培养。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE诱导百份(b)。(c,d) CD25诱导百份(c)和CD134诱导百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计里的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

正确性：我们计算出来的正确性是，来自缓很慢实质性次子的再生知觉CD4+Treg在GITR隐含里赢取了扩展到和丰富，强调了进一步归纳Treg在1改型乳癌风险性状里的异质性的必要性。

记事记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28